Plásmido CRISPR de Activación (h) MRP-S18B: sc-412012-ACT

MRPS18B codifica la proteína ribosomal mitocondrial humana MRP-S18B, un componente de la subunidad pequeña 28S que respalda la traducción de proteínas de fosforilación oxidativa codificadas por el genoma mitocondrial. Al contribuir a la síntesis de proteínas mitocondriales, MRP-S18B ayuda a mantener la integridad de la cadena de transporte de electrones, la producción de ATP y la homeostasis mitocondrial general. La alteración de la función del mitorribosoma puede remodelar el metabolismo energético celular y aumentar el estrés oxidativo, vinculando la biología asociada a MRPS18B con vías que regulan el control de calidad mitocondrial, la proteostasis y la señalización de estrés. La capacidad de traducción mitocondrial alterada se observa con frecuencia en contextos de neurodegeneración, disfunción cardiometabólica y reprogramación metabólica asociada al cáncer, lo que hace de MRPS18B un nodo útil para estudios mecanísticos.

MRP-S18B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MRPS18B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MRP-S18B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MRPS18B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MRPS18B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MRP-S18B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MRPS18B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MRP-S18B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MRP-S18B en células tumorales con expresión de MRPS18B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.