MRP-L18 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409905-ACT

MRPL18 codifica a proteína ribossômica mitocondrial humana MRP-L18, um componente da subunidade maior do mitorribossomo 55S, necessária para a tradução de subunidades da fosforilação oxidativa (OXPHOS) codificadas pelo genoma mitocondrial. Ao sustentar a síntese proteica mitocondrial, a MRP-L18 contribui para a biogênese da cadeia de transporte de elétrons, a respiração celular, a produção de ATP e a manutenção subsequente da homeostase redox e metabólica. Alterações em proteínas mitorribossômicas estão amplamente associadas a fenótipos de disfunção mitocondrial, incluindo mudanças na bioenergética, sinalização de estresse e comprometimento de programas de expressão gênica mitocondrial observados em diversos contextos relevantes para doenças.

MRP-L18 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MRPL18 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MRP-L18 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MRPL18 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MRPL18, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MRP-L18. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MRPL18 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MRP-L18 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MRP-L18 em células tumorais com expressão de MRPL18 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.