MPZL1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407478-ACT

MPZL1 (myelin protein zero-like 1), também conhecida como PZR, codifica uma proteína transmembranar da superfamília das imunoglobulinas que atua como um arcabouço para a sinalização por fosfatases de tirosina, sobretudo por meio da SHP2 (PTPN11). Por meio de seus motivos citoplasmáticos ITIM, a MPZL1 modula vias dependentes de fosforilação que controlam a adesão celular, o espalhamento, a migração e a remodelação do citoesqueleto, integrando sinais de receptores tirosina-quinase e de interações com a matriz extracelular. A sinalização associada à MPZL1 tem sido relacionada à regulação da dinâmica das adesões focais e da atividade da via MAPK/ERK, influenciando fenótipos proliferativos e migratórios em diversos contextos celulares. A expressão ou a sinalização desregulada de MPZL1 foi relatada em processos relevantes para a oncologia, como comportamento associado à invasão e à metástase, sustentando seu uso em estudos mecanísticos de redes de sinalização e de fenótipos dirigidos por adesão.

MPZL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MPZL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MPZL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MPZL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MPZL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MPZL1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MPZL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MPZL1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MPZL1 em células tumorais com expressão de MPZL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.