mPRε CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408586-ACT

PAQR9は、細胞膜上での非古典的なステロイドシグナル伝達に関与するとされるプロゲスチン／アディポQ受容体ファミリーの一員である膜型プロゲステロン受容体イプシロン（mPRε）をコードします。mPRεは、プロゲステロンによって誘導される迅速なシグナル伝達と関連づけられており、cAMP/PKAやMAPK/ERKの動態調節を含むセカンドメッセンジャー経路に影響を与え、結果として細胞増殖、分化、ストレス応答に下流効果を及ぼし得ます。ヒト組織では、PAQR9の発現がホルモン応答性の状況で観察されており、生殖生物学における役割や、より広範な内分泌調節への関与を支持しています。PAQRファミリー受容体が関与するプロゲスチンシグナル伝達経路の破綻は、がん生物学におけるホルモン駆動性表現型、代謝恒常性、神経内分泌機能の機序研究において重要な関連性を持ちます。

mPRε CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PAQR9の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

mPRε CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PAQR9 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPAQR9転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性mPRεの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPAQR9遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるmPRε依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPAQR9発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるmPRε経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。