mPRδ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-413309-ACT

PAQR6 codifica o recetor de progesterona de membrana delta (mPRδ), um membro da família de recetores de progestinas e adipoQ, implicado na sinalização rápida, não genómica, de esteroides nas membranas celulares. O mPRδ está associado à modulação de vias de segundos mensageiros, como a sinalização acoplada a proteínas G, influenciando o fluxo de cálcio, a dinâmica do AMPc e a atividade de quinases a jusante, que podem moldar decisões de estado celular, incluindo proliferação, migração e respostas ao stress. Em tecidos humanos, a expressão de PAQR6 tem sido associada a biologia responsiva a hormonas e a redes de sinalização de progesterona iniciadas na membrana, que se cruzam com a regulação metabólica e processos inflamatórios. A desregulação da sinalização de PAQR6/mPRδ tem sido estudada no contexto de fisiopatologia associada a hormonas e como um fator contributivo para programas celulares relevantes para a biologia do cancro e a função do sistema reprodutor.

mPRδ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PAQR6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

mPRδ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PAQR6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PAQR6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de mPRδ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PAQR6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de mPRδ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via mPRδ em células tumorais com expressão de PAQR6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.