MOZ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403564-ACT

O KAT6A humano codifica a acetiltransferase de lisina MOZ, uma acetiltransferase de histonas da família MYST que acetila H3/H4 e atua como co-regulador transcricional em enhancers e promotores. A MOZ integra-se ao remodelamento de cromatina e à transcrição dependente da RNA polimerase II para controlar programas de destino celular, incluindo a diferenciação hematopoética e a manutenção de células-tronco/progenitoras. Por meio de suas funções na regulação epigenética, o KAT6A influencia vias que governam a proliferação, as respostas a danos no DNA e a expressão gênica específica de linhagem. A desregulação da atividade de KAT6A/MOZ, incluindo eventos de fusão oncogênica e expressão alterada, tem sido implicada em neoplasias hematológicas e em uma instabilidade transcricional/epigenômica mais ampla relevante para pesquisas em biologia do câncer.

MOZ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KAT6A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MOZ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KAT6A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KAT6A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MOZ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KAT6A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MOZ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MOZ em células tumorais com expressão de KAT6A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.