MMD Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-426581

Visão geral

Mmd codifica a MMD, uma proteína de membrana multipasse enriquecida no complexo de Golgi e no sistema endomembranar, que tem sido associada à maturação da linhagem mieloide e à biologia de células da imunidade inata. Estudos implicam a MMD na regulação do tráfego de membranas e de saídas de sinalização que moldam as respostas inflamatórias, com ligações a vias MAPK/ERK e a vias associadas a citocinas em macrófagos e tipos celulares relacionados. Alterações na expressão de MMD foram relatadas em diferentes contextos imunes e tumorais, sustentando seu uso como um nó mecanístico para investigar como programas mieloides se conectam ao estresse celular e a sinais do microambiente. Em modelos murinos, a perturbação de MMD oferece uma forma de dissecar a sinalização específica de linhagem e fenótipos de inflamação em nível de órgão, sem fazer inferências terapêuticas ou clínicas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MMD (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Mmd em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Mmd, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Mmd na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MMD.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Mmd para a investigação da sinalização de MMD, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Mmd críticos para a função MMD
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Mmd para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo MMD Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo MMD Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Mmd. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo MMD Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR MMD (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Mmd para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Mmd definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.