MLTK Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-437372
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- MLTK O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico MLTK, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:MLTK Anticorpo (A-2): sc-390924
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
MLTK Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-437372 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Map3k20 codifica a proteína semelhante às quinases de linhagem mista (MLTK), uma MAP3K de serina/treonina que conecta sinais upstream de estresse e inflamação a cascatas de sinalização de MAPK, incluindo as vias de JNK e p38. Por meio da fosforilação de MAP2Ks a jusante, a MLTK contribui para a regulação de programas transcricionais que controlam a apoptose, a remodelagem do citoesqueleto e a adaptação celular ao estresse ambiental. Em sistemas murinos, a atividade de Map3k20 tem sido associada a decisões de destino celular em resposta a estresse genotóxico e oxidativo e pode influenciar nós de sinalização que se cruzam com vias da imunidade inata e da homeostase tecidual. A desregulação do “cabeamento” da via de MAPK envolvendo MAP3Ks como a MLTK é amplamente relevante para modelos de neurodegeneração, patologia inflamatória e sinalização de estresse associada ao câncer, tornando Map3k20 um alvo útil para dissecação mecanística.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MLTK (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Map3k20 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Map3k20, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Map3k20 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MLTK.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Map3k20 para a investigação da sinalização de MLTK, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Map3k20 críticos para a função MLTK
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Map3k20 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo MLTK Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo MLTK Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Map3k20. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo MLTK Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR MLTK (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Map3k20 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Map3k20 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.