Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MLN64 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405166
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- MLN64 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico MLN64, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MLN64 Anticuerpo (H-1): sc-166215
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
MLN64 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-405166 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
STARD3 codifica MLN64, una proteína de membrana de endosomas tardíos/lisosomas que contiene un dominio START que media el transporte intracelular de colesterol. MLN64 contribuye al tráfico de esteroles desde los endosomas hacia sitios de esteroidogénesis y biogénesis de membranas, conectando el manejo endocítico de lípidos con la utilización mitocondrial de colesterol y con redes más amplias de homeostasis lipídica. A través de sus efectos sobre la distribución del colesterol y la dinámica de contactos entre orgánulos, la actividad de STARD3 se cruza con vías que controlan la composición de membranas, la compartimentalización de la señalización y las respuestas al estrés celular. La expresión desregulada de STARD3 se ha asociado con alteraciones del metabolismo lipídico y se ha estudiado en el contexto de fenotipos proliferativos y metabólicos relevantes para la biología del cáncer y la neurodegeneración.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO MLN64 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen STARD3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del STARD3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de STARD3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MLN64.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en STARD3 para la investigación de la señalización de MLN64, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de STARD3 críticos para la función de MLN64
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de STARD3 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido MLN64 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MLN64 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus STARD3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MLN64 (h) y el plásmido HDR MLN64 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología STARD3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana STARD3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.