MLF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421659

概要

マウスMlf1は、骨髄性白血病因子1（MLF1）をコードしており、転写制御や細胞周期に連動したプロセスに関与する、造血細胞の振る舞いを調節する保存性の高い因子です。MLF1は、増殖および分化プログラムに影響を与える核内因子との相互作用を介して、系譜決定や細胞ストレス応答を調節することが示唆されています。MLF1活性の変化は、異常な骨髄系の生物学や白血病化に関連する経路と結び付いており、転写調節と増殖制御をつなぐ機構を研究する上で有用な結節点となります。実験系では、Mlf1を撹乱することで、腫瘍性シグナルや分化シグナルの刺激下で、造血細胞および免疫細胞の状態がどのように安定化／不安定化するかを検証できます。

MLF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるMlf1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Mlf1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Mlf1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MLF1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MLF1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Mlf1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MLF1の機能に不可欠なMlf1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Mlf1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MLF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMLF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Mlf1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MLF1 HDRプラスミド（m）および MLF1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMlf1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMlf1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。