MKP-6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406250
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- MKP-6 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico MKP-6, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MKP-6 Anticuerpo (4B5-E6): sc-517023
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
MKP-6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406250 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
La fosfatasa de proteínas de doble especificidad 14 (DUSP14), también conocida como MKP-6, es una fosfatasa citoplasmática de MAPK que desfosforila residuos de treonina y tirosina para atenuar la señalización de MAPK. Modula principalmente vías sensibles al estrés y a citocinas, incluidas las cascadas de JNK y p38 MAPK, dando forma a programas transcripcionales aguas abajo que controlan la proliferación, la apoptosis y las respuestas inflamatorias. A través de su función como regulador de retroalimentación negativa de la actividad de MAPK, DUSP14 ayuda a ajustar la amplitud y la duración de la señal en contextos inmunitarios y epiteliales. La expresión o actividad desregulada de DUSP14 se ha asociado con una homeostasis de señalización alterada observada en la biología del cáncer y en mecanismos de enfermedades mediadas por el sistema inmunitario, lo que respalda su uso como un nodo para estudios centrados en vías.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO MKP-6 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DUSP14 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DUSP14 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DUSP14 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MKP-6.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DUSP14 para la investigación de la señalización de MKP-6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de DUSP14 críticos para la función de MKP-6
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DUSP14 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido MKP-6 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MKP-6 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DUSP14. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MKP-6 (h) y el plásmido HDR MKP-6 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DUSP14 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DUSP14 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.