MKP-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406250

概要

二重特異性タンパク質ホスファターゼ14（DUSP14、別名MKP-6）は細胞質に存在するMAPKホスファターゼで、スレオニンおよびチロシン残基の脱リン酸化を介してMAPKシグナル伝達を減弱させます。主としてストレスやサイトカインに応答する経路、特にJNKおよびp38 MAPKカスケードを調節し、増殖、アポトーシス、炎症応答を制御する下流の転写プログラムを形作ります。MAPK活性の負のフィードバック調節因子としての役割を通じて、DUSP14は免疫系および上皮系の文脈でシグナルの強度と持続時間の微調整に寄与します。DUSP14の発現や活性の異常は、がん生物学や免疫介在性疾患の機序でみられるシグナル恒常性の変化と関連づけられており、経路中心の研究における重要なノードとしての利用を支持します。

MKP-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDUSP14遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DUSP14内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DUSP14のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MKP-6タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MKP-6シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DUSP14欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MKP-6の機能に不可欠なDUSP14エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DUSP14ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MKP-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMKP-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DUSP14遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MKP-6 HDRプラスミド（h）および MKP-6 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDUSP14ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDUSP14標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。