Mitochondrial Topo I Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-408700

Descripción general

TOP1MT codifica la topoisomerasa I del ADN mitocondrial, una topoisomerasa de tipo IB que resuelve el estrés torsional generado durante la replicación y la transcripción del ADNmt mediante la introducción de roturas transitorias de una sola hebra y su posterior religación. Al mantener la topología del genoma mitocondrial, TOP1MT favorece la expresión génica mitocondrial, la organización de los nucleoides y la capacidad de fosforilación oxidativa. La alteración de la función de TOP1MT se ha relacionado con cambios en la integridad del ADNmt, un rendimiento deficiente de la cadena respiratoria y una mayor sensibilidad al estrés mitocondrial. Estos procesos son relevantes para estudios sobre la disfunción mitocondrial en la neurodegeneración, las enfermedades cardiometabólicas y la bioenergética de células cancerosas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Mitochondrial Topo I (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TOP1MT en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TOP1MT junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TOP1MT tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Mitochondrial Topo I.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TOP1MT para la investigación de la señalización de Mitochondrial Topo I, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TOP1MT críticos para la función de Mitochondrial Topo I
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TOP1MT para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Mitochondrial Topo I CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Mitochondrial Topo I CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TOP1MT. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Mitochondrial Topo I (h) y el plásmido HDR Mitochondrial Topo I (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TOP1MT para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TOP1MT definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.