Plasmide CRISPR/Cas9 KO mitochondrial ferritin (m): sc-426664

Présentation

Ftmt code la ferritine mitochondriale, une protéine de stockage du fer localisée dans la matrice mitochondriale, qui aide à tamponner le fer labile et à limiter les dommages oxydatifs dépendants du fer. En séquestrant le fer ferreux et en influençant le métabolisme de l’hème et des centres fer‑soufre, Ftmt contribue à l’homéostasie rédox mitochondriale, à la fonction respiratoire et aux réponses cellulaires au stress oxydant. Une altération de la gestion du fer au niveau mitochondrial est impliquée dans des voies associées à la ferroptose, aux maladies neurodégénératives, aux myopathies et à d’autres troubles caractérisés par une dysfonction mitochondriale et un déséquilibre des espèces réactives de l’oxygène. Dans des modèles murins, Ftmt est utilisé pour étudier le trafic du fer spécifique des tissus, le contrôle qualité mitochondrial et l’adaptation au stress dans les systèmes métaboliques et neuronaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO mitochondrial ferritin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ftmt dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ftmt, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ftmt à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine mitochondrial ferritin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ftmt pour l'étude de la signalisation de mitochondrial ferritin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ftmt essentiels à la fonction de mitochondrial ferritin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ftmt pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le mitochondrial ferritin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le mitochondrial ferritin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ftmt. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le mitochondrial ferritin plasmide HDR (m) et le mitochondrial ferritin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ftmt pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ftmt définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.