MISR II Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402523-ACT

AMHR2 codifica o receptor do hormônio anti-Mülleriano tipo 2 (MISR II), um receptor transmembranar com atividade quinase de serina/treonina da superfamília TGF-β, que medeia a sinalização iniciada pelo hormônio anti-Mülleriano. Após a ligação do ligante, o MISR II coopera com receptores do tipo I para ativar programas transcricionais dependentes de SMAD, que regulam a regressão dos ductos de Müller durante a embriogênese masculina e influenciam a diferenciação de células das gônadas e do trato reprodutivo. Em tecidos adultos, a sinalização AMH–AMHR2 contribui para a foliculogênese ovariana e para decisões de destino celular por meio de crosstalk dependente do contexto com as vias BMP/TGF-β. A expressão ou a sinalização desreguladas de AMHR2 têm sido associadas a distúrbios do desenvolvimento sexual e são investigadas em biologia reprodutiva e em modelos de doenças relacionadas ao sistema endócrino.

MISR II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AMHR2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MISR II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AMHR2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AMHR2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MISR II. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AMHR2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MISR II no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MISR II em células tumorais com expressão de AMHR2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.