MIP-3β Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403239

Descripción general

CCL19 codifica la quimiocina MIP-3β (también conocida como CCL19), un ligando de CCR7 que dirige la quimiotaxis de linfocitos T naïve, linfocitos T de memoria central y células dendríticas maduras hacia los tejidos linfoides. Al modular el tráfico de leucocitos, favorece el homing a los ganglios linfáticos, la formación de la sinapsis inmunológica y una presentación de antígeno coordinada dentro de la zona de células T. La señalización MIP-3β–CCR7 se entrecruza con vías impulsadas por GPCR que regulan la remodelación del citoesqueleto, la adhesión y la polarización migratoria, influyendo en la arquitectura y la función de los órganos linfoides secundarios. La expresión o señalización desregulada de CCL19 se ha asociado con patrones alterados de infiltración inmunitaria en la inflamación crónica, la autoinmunidad y los microambientes tumorales, lo que la convierte en una diana útil para estudios de inmunología mecanística.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MIP-3β (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CCL19 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CCL19 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CCL19 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MIP-3β.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CCL19 para la investigación de la señalización de MIP-3β, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CCL19 críticos para la función de MIP-3β
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CCL19 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MIP-3β CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MIP-3β CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CCL19. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MIP-3β (h) y el plásmido HDR MIP-3β (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CCL19 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CCL19 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.