MIP-3β CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403239

概要

CCL19はケモカインMIP-3β（別名CCL19）をコードしており、CCR7のリガンドとして、ナイーブT細胞、セントラルメモリーT細胞、成熟樹状細胞をリンパ組織へと走化性により誘導します。白血球のトラフィッキングを形成することで、リンパ節へのホーミング、免疫シナプス形成、ならびにT細胞領域における協調的な抗原提示を支えます。MIP-3β–CCR7シグナルは、細胞骨格再構築、接着、移動の極性化を制御するGPCR駆動性経路と交差し、二次リンパ組織の構造と機能に影響を及ぼします。CCL19の発現やシグナル伝達の破綻は、慢性炎症、自己免疫、腫瘍微小環境における免疫細胞浸潤パターンの変化と関連づけられており、機械論的免疫学研究の有用な標的となっています。

MIP-3β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCCL19遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CCL19内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CCL19のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MIP-3βタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MIP-3βシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CCL19欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MIP-3βの機能に不可欠なCCL19エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CCL19ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MIP-3β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMIP-3β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CCL19遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MIP-3β HDRプラスミド（h）および MIP-3β HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCCL19ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCCL19標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。