MIP-3α CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422839

概要

Ccl20 は、ケモカインであるマクロファージ炎症性タンパク質-3α（MIP-3α）をコードしており、CCR6 の分泌性リガンドとして、上皮が活性化した部位へ未熟樹状細胞、メモリーT細胞、B細胞の走化性移動を誘導します。NF-κB および炎症性サイトカインによって誘導される CCL20 は、白血球のトラフィッキング、粘膜免疫監視、ならびに炎症性微小環境の形成に関与します。CCL20–CCR6 シグナルの異常は、慢性炎症過程や自己免疫の病態形成と関連づけられており、上皮バリア機能障害や腫瘍関連の免疫細胞リクルートの文脈で頻繁に研究されています。マウスでは、Ccl20 は、免疫・炎症研究においてケモカイン駆動性の細胞移動やサイトカインネットワークを解析するための扱いやすい標的（ノード）となります。

MIP-3α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCcl20遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ccl20内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ccl20のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MIP-3αタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MIP-3αシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ccl20欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MIP-3αの機能に不可欠なCcl20エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ccl20ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MIP-3α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMIP-3α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ccl20遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MIP-3α HDRプラスミド（m）および MIP-3α HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCcl20ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCcl20標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。