Plásmido CRISPR de Activación (h) MICB: sc-401524-ACT

MICB codifica la secuencia B relacionada con el polipéptido del MHC de clase I, un ligando inducible por estrés que se presenta en la superficie de las células humanas y que se une al receptor activador NKG2D en células NK y en subpoblaciones de células T. La expresión de MICB está regulada por programas de estrés celular, incluidas las respuestas al daño del ADN, el estrés oxidativo y la señalización asociada a infecciones, lo que vincula la vigilancia inmunitaria innata con cambios en la proteostasis y el control del ciclo celular. Como parte del eje de ligandos de NKG2D, MICB participa en vías de inmunorreconocimiento que influyen en la activación de linfocitos citotóxicos y en la producción de citocinas. La expresión desregulada de MICB o su liberación por desprendimiento (shedding) se ha asociado con fenotipos de evasión inmunitaria y con señalización inflamatoria en biología del cáncer y en modelos de infección crónica, lo que respalda su uso en estudios de interacciones tumor–sistema inmunitario.

MICB El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MICB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MICB El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MICB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MICB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MICB. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MICB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MICB en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MICB en células tumorales con expresión de MICB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.