MGMT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421647
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- MGMT Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im MGMT-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MGMT: sc-166528
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MGMT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-421647 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Mouse **Mgmt** kodiert die O-6-Methylguanin-DNA-Methyltransferase (MGMT), ein direkt wirkendes DNA-Reparaturenzyme, das Alkyladdukte an der O6-Position von Guanin entfernt, indem es die Läsion in einer einmaligen „Suizid“-Reaktion auf ein aktives Cystein im katalytischen Zentrum überträgt. Diese Aktivität wirkt Mutagenese und Replikationsstress entgegen, die durch endogene und umweltbedingte alkylierende Schäden entstehen, und ist mit Programmen zur Genomerhaltung verknüpft, die die Verarbeitung durch die Mismatch-Reparatur sowie die Signalgebung von Zellzyklus-Checkpoints beeinflussen. Eine veränderte MGMT-Funktion oder -Expression wird breit in Zusammenhängen alkylierungsinduzierter genomischer Instabilität und der Tumorbiologie untersucht, da die DNA-Reparaturkapazität Mutationsspektren und zelluläre Stressantworten prägen kann. In der Maus stellt **Mgmt** ein gut handhabbares System dar, um DNA-Schadensantwort-Signalwege, gewebespezifische Reparaturbiologie und Mechanismen zu untersuchen, die Alkylierungsläsionen mit Karzinogenese- und Neurotoxizitätsmodellen verknüpfen.
Das MGMT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Mgmt-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Mgmt-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Mgmt nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MGMT-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Mgmt-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MGMT-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Mgmt-Exone abzielen, die für die MGMT-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Mgmt-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom MGMT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom MGMT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Mgmt-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MGMT HDR-Plasmid (m) und MGMT HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Mgmt-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Mgmt-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.