Mfn1/Mitofusin 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-426545-ACT

O gene Mfn1 de camundongo codifica a mitofusina 1, uma GTPase relacionada à dinamina localizada na membrana externa da mitocôndria, que medeia o ancoramento e a fusão mitocondrial para manter a conectividade da rede e a capacidade bioenergética. A MFN1 coopera com a MFN2 durante a fusão da membrana externa e se acopla funcionalmente a programas de fusão da membrana interna e de organização das cristas, sustentando a fosforilação oxidativa, a regulação de cálcio e a estabilidade do DNA mitocondrial. Ao moldar a morfologia mitocondrial, a MFN1 influencia a mitofagia e a sinalização de apoptose, conectando o controle de qualidade mitocondrial às respostas celulares ao estresse. Um desequilíbrio na dinâmica de fusão–fissão mitocondrial envolvendo a MFN1 é relevante em estudos de neurodegeneração, estresse cardiometabólico e fenótipos do desenvolvimento, nos quais a dinâmica mitocondrial afeta a homeostase tecidual.

Mfn1/Mitofusin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Mfn1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Mfn1/Mitofusin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Mfn1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Mfn1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Mfn1/Mitofusin 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Mfn1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Mfn1/Mitofusin 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Mfn1/Mitofusin 1 em células tumorais com expressão de Mfn1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.