Mex3c CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408878-ACT

ヒトMEX3CはMex3cをコードしており、KHドメインとC3H1型RINGフィンガーを有するRNA結合タンパク質である。Mex3cは、配列選択的なmRNA結合、局在制御、安定性制御を介して転写後遺伝子制御を支える。Mex3cは翻訳プログラムや細胞分化に影響するRNA代謝ネットワークに関与し、変動する代謝状態の下でのプロテオスタシスおよびシグナル伝達の適応と結び付けられている。報告されている機能的関連としては、mRNAターンオーバーの制御や、細胞増殖とストレス応答を形作るユビキチン関連プロセスの調節が挙げられる。MEX3C発現の破綻は、疾患に関連する転写シグネチャーで観察されており、代謝機能障害やがんに伴うRNA制御の再編成の基盤となる機構の解明に向けた研究対象として支持されている。

Mex3c CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MEX3Cの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Mex3c CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MEX3C 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMEX3C転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Mex3cの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMEX3C遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMex3c依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMEX3C発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMex3c経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。