METTL3 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-425096-ACT

Mettl3は、mRNAをはじめとする各種RNAにN6-メチルアデノシン（m6A）修飾を付加するm6A RNAメチルトランスフェラーゼ複合体の触媒中核であるMETTL3をコードする。m6Aはスプライシング、核外輸送、翻訳効率、RNA安定性を制御することで遺伝子発現を調節する。METTL3は、METTL14やWTAPなどの補因子、さらに下流のm6Aリーダー／エレイサーとの協調を通じて、細胞周期進行、分化、ストレス応答を制御する遺伝子発現プログラムに影響を与える。マウス系では、METTL3活性の変化が造血・免疫細胞の運命決定、神経発生過程、代謝調節の変動と関連づけられており、RNAプロセシング経路に対する広範な影響を反映している。m6Aシグナルの破綻は、がん化や炎症性の転写状態とも関連するため、Mettl3は疾患関連表現型のエピトランスクリプトーム制御を研究する上で広く用いられる標的である。

METTL3 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Mettl3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

METTL3 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Mettl3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMettl3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性METTL3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMettl3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMETTL3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMettl3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMETTL3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。