melanopsin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402783-ACT

ヒトOPN4はメラノプシンをコードしており、メラノプシンは網膜オプシンの一種で、Gタンパク質共役型の光色素として、特定の網膜神経節細胞に備わる内因性の光感受性を媒介することで最もよく知られています。光で活性化されると、メラノプシンは主にGq/11シグナル伝達に共役してPLCβを刺激し、細胞内カルシウム濃度を上昇させるとともに、神経細胞の興奮性や転写プログラムに影響を与える下流経路を調節します。この光受容シグナル軸は、概日リズムの光同調や瞳孔反射の調節など、像形成に依存しない視覚機能に寄与し、OPN4活性を睡眠—覚醒のタイミングや神経内分泌リズムと結び付けています。メラノプシンシグナルの変化は、概日リズムの乱れや、光依存的な生理応答との関連で研究されており、神経行動学および網膜研究において重要な対象となっています。

melanopsin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性OPN4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

melanopsin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における OPN4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はOPN4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性melanopsinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のOPN4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるmelanopsin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびOPN4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるmelanopsin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。