MEK kinase-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403653-ACT

MAP3K2 codifica a MEK kinase-2, uma quinase quinase quinase de MAP quinases (MAP3K) que retransmite sinais upstream de estresse e citocinas para cascatas MAPK downstream. A MEK kinase-2 integra estímulos provenientes de receptores e de pequenas GTPases para modular as saídas de sinalização de ERK, JNK e p38, moldando programas transcricionais que controlam proliferação, diferenciação, migração e respostas inflamatórias. Por seu papel na dinâmica da rede de MAPKs e na expressão gênica dependente de sinal, MAP3K2 é frequentemente estudado em contextos de sinalização oncogênica, regulação imune e adaptação celular ao estresse. A atividade desregulada de vias envolvendo MAP3K2 tem sido associada a alterações na responsividade a fatores de crescimento e a fenótipos ligados à inflamação, relevantes para pesquisas mecanicistas de doenças.

MEK kinase-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAP3K2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MEK kinase-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAP3K2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAP3K2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MEK kinase-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAP3K2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MEK kinase-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MEK kinase-2 em células tumorais com expressão de MAP3K2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.