MEF-2A Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400484-LAC

MEF2A codifica o fator de transcrição MEF-2A, um regulador da família MADS-box/MEF2 que integra sinalização dependente de cálcio e entradas de MAPK para controlar programas gênicos que regem a miogênese, a diferenciação neuronal, a remodelação sináptica e respostas ao estresse celular. A atividade do MEF-2A é modulada por modificações pós-traducionais e interações com cofatores, ligando-o à remodelação da cromatina e à transcrição dependente de estímulos em linhagens musculares, imunes e neurais. Alterações na expressão de MEF2A ou em seu controle regulatório têm sido associadas à biologia vascular e à função cardíaca, e a desregulação mais ampla da via MEF2 está implicada em contextos de neurodesenvolvimento e neurodegeneração. Como um nó em redes transcricionais dependentes de CREB/HDAC e calcineurina, o MEF-2A é frequentemente estudado por seu papel na especificação de linhagem, na adaptação metabólica e na expressão gênica dependente de atividade.

As Partículas de Ativação Lentivirais MEF-2A (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de MEF2A numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais MEF-2A (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição MEF2A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de MEF-2A. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo MEF2A e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.