Plásmido Doble Nickase (h) MEF-2A: sc-400484-NIC

MEF2A codifica el factor potenciador miocitario 2A (MEF-2A), un factor de transcripción de la familia MADS-box/MEF2 que integra señales dependientes de calcio y de MAPK para regular programas de expresión génica específicos de cada tipo celular. MEF-2A participa en redes de transcripción reguladas por la cromatina y por cofactores, aguas abajo de vías como CaMK, calcineurina–NFAT, p38 MAPK y la represión mediada por HDAC de clase IIa, conectando señales extracelulares con procesos de diferenciación, supervivencia y respuestas al estrés. Está ampliamente implicado en la regulación de la expresión génica muscular y neuronal, así como en la transcripción dependiente de la actividad. La desregulación de la señalización de MEF2A se ha asociado con fenotipos cardiovasculares y del neurodesarrollo, lo que lo convierte en un objetivo útil para explorar la circuitería transcripcional en modelos celulares humanos.

MEF-2A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MEF2A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MEF2A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MEF2A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MEF2A alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.