MEF-2A Double Nickaseプラスミド (h): sc-400484-NIC

MEF2Aは、筋細胞エンハンサー因子2A（myocyte enhancer factor 2A：MEF-2A）をコードしています。MEF-2AはMADS-box/MEF2ファミリーに属する転写因子で、カルシウム依存性およびMAPK依存性のシグナルを統合し、細胞種特異的な遺伝子発現プログラムを制御します。MEF-2Aは、CaMK、カルシニューリン–NFAT、p38 MAPK、クラスIIa HDACによる抑制などの経路の下流で、クロマチンおよびコファクターにより制御される転写ネットワークに関与し、細胞外からの刺激を分化・生存・ストレス応答へと結び付けます。筋および神経系の遺伝子発現の制御、ならびに活動依存的転写にも広く関与するとされています。MEF2Aシグナルの破綻は心血管系および神経発達に関連する表現型と関連付けられており、ヒト細胞モデルにおける転写回路を検証するための有用な標的となります。

MEF-2A ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MEF2A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MEF2A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MEF2Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MEF2Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。