Plásmido CRISPR de Activación (h) Med6: sc-403204-ACT

El gen humano MED6 codifica Med6, una subunidad esencial del complejo Mediator que acopla factores de transcripción específicos de secuencia con la ARN polimerasa II para regular el inicio de la transcripción. Med6 favorece el ensamblaje y la función del complejo de preiniciación y contribuye al control amplio de programas de expresión génica vinculados a la progresión del ciclo celular, la diferenciación y la señalización de respuesta al estrés. Como correagulador transcripcional central, la alteración de MED6 puede influir en vías que gobiernan la transcripción dependiente de la cromatina y la estabilidad global del transcriptoma. La actividad desregulada de Mediator se ha implicado en redes transcripcionales oncogénicas y otros trastornos de la expresión génica, lo que convierte a MED6 en un nodo útil para estudios mecanísticos del control transcripcional.

Med6 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MED6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Med6 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MED6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MED6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Med6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MED6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Med6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Med6 en células tumorales con expresión de MED6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.