Med4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406004-ACT

O gene humano **MED4** codifica a proteína Med4, uma subunidade conservada do complexo Mediator que conecta fatores de transcrição específicos de sequência à RNA polimerase II para coordenar o início da transcrição. A Med4 contribui para programas transcricionais que regulam a progressão do ciclo celular, a diferenciação e a expressão gênica responsiva ao estresse, por meio de uma ampla regulação da transcrição dependente da Pol II. A perturbação de subunidades do Mediator pode alterar a produção transcricional global, com efeitos a jusante sobre proliferação, estabilidade do genoma e redes regulatórias específicas de linhagem, que são frequentemente modificadas no câncer e em outros distúrbios envolvendo desregulação transcricional. Como um nó no controle da transcrição, **MED4** é útil para estudar como a arquitetura do Mediator ajusta a ativação de promotores e a expressão gênica dependente de sinalização.

Med4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MED4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Med4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MED4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MED4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Med4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MED4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Med4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Med4 em células tumorais com expressão de MED4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.