Plásmido CRISPR de Activación (h) Med15: sc-405129-ACT

El gen humano **MED15** codifica **Med15**, una subunidad central del complejo coactivador transcripcional **Mediator**, que conecta factores de transcripción específicos de secuencia con la **ARN polimerasa II** para regular programas de expresión génica. Med15 favorece la transcripción dependiente de estímulos e integra señales que modulan el estado de la cromatina y la comunicación entre promotores y potenciadores, influyendo en procesos como el control del ciclo celular, las respuestas al estrés y la diferenciación. La actividad alterada de **MED15** se ha asociado con la reprogramación transcripcional observada en múltiples contextos patológicos, incluidas vías relevantes en cáncer que dependen de la transcripción mediada por Mediator. Por ello, **MED15** se estudia con frecuencia por su papel en la regulación de redes génicas específicas de vías y la plasticidad transcripcional en modelos celulares humanos.

Med15 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MED15 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Med15 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MED15 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MED15, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Med15. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MED15 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Med15 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Med15 en células tumorales con expresión de MED15 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.