MDR1/ABCB1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-422215-ACT

マウス Abcb1b は、多剤耐性トランスポーター MDR1/ABCB1 をコードしており、これは ATP 結合カセット（ABC）型の排出ポンプとして機能し、構造的に多様な外来性化学物質（ゼノバイオティクス）や代謝産物の細胞内蓄積を制限します。ATP 加水分解と基質の排出を結び付けることで、MDR1 は薬物動態上のバリアや細胞の解毒プログラムに影響し、上皮輸送、血液—組織バリア機能、有害物質による毒性ストレスへの応答などの過程を形作ります。その活性は、シグナル伝達脂質や環境化学物質に対する細胞内曝露を制御することを通じて、炎症性および代謝性シグナルとも交差しており、薬物動態（ディスポジション）や多剤耐性表現型の文脈で頻繁に研究されています。MDR1/ABCB1 の発現異常は、治療抵抗性疾患のモデルや、in vivo におけるトランスポーター媒介性バイオアベイラビリティの機構研究において重要です。

MDR1/ABCB1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Abcb1bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MDR1/ABCB1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Abcb1b 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAbcb1b転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MDR1/ABCB1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAbcb1b遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMDR1/ABCB1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAbcb1b発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMDR1/ABCB1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。