MDA5 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-427977-ACT

マウスの Ifih1 は、細胞質性の DExD/H ボックス RNA ヘリカーゼである MDA5（IFIH1）をコードしており、ウイルス複製の過程で生じる長鎖二本鎖 RNA や、その他の異常な RNA を検知します。リガンド結合により、MDA5 はアダプター分子 MAVS を介してシグナル伝達を行い、IRF3/IRF7 および NF-κB 経路を活性化して、I 型インターフェロンとインターフェロン誘導遺伝子の発現を誘導し、自然免疫および獲得免疫応答を形成します。この RNA センシング軸は、抗ウイルス制限、炎症性サイトカインプログラム、ならびにオートファジーやストレスグラニュール動態とのクロストークにも影響します。MDA5 活性やインターフェロンシグナルの異常な亢進は、インターフェロン病や自己免疫様炎症と関連づけられており、実験モデルにおける腫瘍免疫センシングや宿主—病原体相互作用の観点からも重要です。

MDA5 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Ifih1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MDA5 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Ifih1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIfih1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MDA5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIfih1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMDA5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIfih1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMDA5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。