CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
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MCR Double Nickaseプラスミド (h): sc-400672-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- MCR Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- MCRダブルニカースプラスミド（h）およびMCRダブルニカースプラスミド（h2）は、NR3C2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: MCR 抗体 (H10E4C9F): sc-53000
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
MCR Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400672-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MCR Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400672-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NR3C2はミネラルコルチコイド受容体（MCR）をコードしており、ミネラルコルチコイドおよびグルココルチコイドに結合して転写プログラムを制御する、リガンド依存性の核内受容体である。これにより、上皮性ナトリウム輸送、カリウム恒常性、細胞外液量、血圧調節が制御される。ホルモンが結合するとMCRは核内へ移行し、ホルモン応答配列およびコレギュレーターとの相互作用を介して遺伝子発現を調節し、MAPKシグナル伝達や炎症性の転写ネットワークとも交差する。腎臓、結腸、心血管系組織においてNR3C2は、ENaC/SGK1によって駆動されるイオン輸送や細胞ストレス応答に影響し、受容体活性を電解質バランスおよび組織リモデリングと結び付けている。NR3C2の機能異常や変異は、塩喪失（salt-wasting）表現型や心血管・腎生理の変化など、ミネラルコルチコイドシグナル伝達の異常に関連する疾患と関連しており、内分泌系および心腎（cardiorenal）経路の機序研究における重要性を支持している。
MCR ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における NR3C2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、NR3C2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、NR3C2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、NR3C2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。