Particules Lentivirales d'Activation (m) MCPIP: sc-432978-LAC

Le gène murin Zc3h12a code MCPIP (également appelé Regnase-1), une endoribonucléase liant l’ARN de type doigt de zinc CCCH qui limite la signalisation inflammatoire en favorisant la dégradation de certains transcrits de cytokines et de réponse immunitaire. MCPIP s’intègre aux voies de l’immunité innée et de réponse au stress, en modulant la sortie de signalisation TLR/IL-1R–NF-κB et en influençant des programmes de stabilité des ARNm qui façonnent les états d’activation des macrophages et des lymphocytes T. Par ses rôles dans la régulation post-transcriptionnelle de l’expression génique, MCPIP est largement étudiée dans des contextes d’homéostasie immunitaire, d’inflammation chronique et de mécanismes liés à l’auto-immunité, ainsi que pour ses effets plus larges sur la différenciation et la survie cellulaires en situation de stress inflammatoire.

Les particules d'activation lentivirales MCPIP (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Zc3h12a dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales MCPIP (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Zc3h12a, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de MCPIP. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Zc3h12a ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.