MBNL1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-425296-ACT

Il gene murino **Mbnl1** codifica **muscleblind-like splicing regulator 1 (MBNL1)**, una proteina legante l’RNA che riconosce i motivi **YGCY** nei pre-mRNA per controllare lo splicing alternativo, la localizzazione dell’mRNA, la stabilità e la poliadenilazione. MBNL1 è una componente centrale delle reti di regolazione genica post-trascrizionale che modellano l’espressione di isoforme specifiche di tessuto durante lo sviluppo, con ruoli di rilievo nei programmi muscolari e neuronali. L’alterazione dell’attività di MBNL1 modifica gli esiti dello splicing lungo vie coinvolte nell’organizzazione del citoscheletro, nella gestione degli ioni e nella funzione sinaptica, contribuendo a cambiamenti ampi dello stato cellulare. La spliceopatia dipendente da MBNL1 è fortemente associata alla biologia della distrofia miotonica, rendendo **Mbnl1** un bersaglio ampiamente utilizzato per modellare la tossicità dell’RNA e l’insufficienza dei fattori di splicing nei sistemi mammiferi.

MBNL1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Mbnl1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MBNL1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Mbnl1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Mbnl1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MBNL1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Mbnl1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MBNL1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MBNL1 nelle cellule tumorali con espressione di Mbnl1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.