MBNL1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-425296-ACT

O gene **Mbnl1** de camundongo codifica o regulador de splicing do tipo muscleblind 1 (MBNL1), uma proteína ligante de RNA que reconhece motivos YGCY em pré-mRNAs para controlar o splicing alternativo, a localização do mRNA, a estabilidade e a poliadenilação. O MBNL1 é um componente central de redes de regulação gênica pós-transcricional que moldam a expressão de isoformas específicas de tecido durante o desenvolvimento, com papéis proeminentes em programas musculares e neuronais. A interrupção da atividade de MBNL1 altera os resultados de splicing em vias envolvidas na organização do citoesqueleto, no manejo de íons e na função sináptica, contribuindo para mudanças amplas no estado celular. A spliceopatia dependente de MBNL1 está fortemente associada à biologia da distrofia miotônica, tornando **Mbnl1** um alvo amplamente utilizado para modelar toxicidade de RNA e insuficiência de fatores de splicing em sistemas de mamíferos.

MBNL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Mbnl1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MBNL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Mbnl1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Mbnl1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MBNL1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Mbnl1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MBNL1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MBNL1 em células tumorais com expressão de Mbnl1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.