MaxiKα Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-402208-LAC

KCNMA1 codifica a subunidade α formadora do poro do canal de potássio de grande condutância ativado por cálcio e voltagem MaxiKα (BK). Esse canal acopla sinais intracelulares de Ca²⁺ e a despolarização da membrana ao efluxo de K⁺, moldando a repolarização do potencial de ação, a frequência de disparo e a pós-hiperpolarização em tecidos excitáveis. A atividade do MaxiKα integra-se a vias de sinalização dependentes de Ca²⁺ e de homeostase iônica para regular o tônus do músculo liso, a excitabilidade neuronal e a secreção. A desregulação da função ou da expressão de KCNMA1 tem sido associada a distúrbios que envolvem alterações de excitabilidade e contratilidade, incluindo fenótipos do neurodesenvolvimento, suscetibilidade a crises convulsivas e disfunção do músculo liso vascular ou das vias aéreas, dando suporte a estudos mecanísticos em modelos celulares relevantes.

As Partículas de Ativação Lentivirais MaxiKα (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de KCNMA1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais MaxiKα (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição KCNMA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de MaxiKα. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo KCNMA1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.