MATE2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404811-ACT

O SLC47A2 humano codifica o transportador de extrusão de múltiplos fármacos e toxinas MATE2 (SLC47A2), um antiporte eletroneutro de cátion orgânico/H+ que medeia o efluxo de metabólitos endógenos e de cátions xenobióticos através de membranas epiteliais. O MATE2 está mais fortemente associado ao transporte no túbulo proximal renal, onde atua em conjunto com transportadores de captação como o OCT2 para coordenar a secreção vetorial de cátions orgânicos e moldar a exposição celular a compostos carregados. Ao controlar a acumulação intracelular de substratos catiônicos, o SLC47A2 influencia a variabilidade farmacocinética, as interações transportador–transportador e respostas ao stress associadas a alterações na capacidade de transporte epitelial. Assim, a expressão desregulada ou variações funcionais no SLC47A2 são relevantes para estudos de fisiologia renal, vias de disposição de fármacos e suscetibilidade associada a transportadores a fenótipos de lesão renal em modelos experimentais.

MATE2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC47A2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MATE2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC47A2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC47A2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MATE2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC47A2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MATE2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MATE2 em células tumorais com expressão de SLC47A2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.