MATE2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404811-ACT

Das humane Gen **SLC47A2** kodiert den Multidrug-and-Toxin-Extrusion-Transporter **MATE2 (SLC47A2)**, einen elektrisch neutralen Antiporter für organische Kationen/H+, der den Efflux endogener Metaboliten und xenobiotischer Kationen über epitheliale Membranen vermittelt. MATE2 wird besonders mit dem Transport im proximalen Nierentubulus in Verbindung gebracht, wo er im Zusammenspiel mit Aufnahmetransportern wie **OCT2** die gerichtete Sekretion organischer Kationen koordiniert und die zelluläre Exposition gegenüber geladenen Verbindungen mitbestimmt. Durch die Kontrolle der intrazellulären Anreicherung kationischer Substrate beeinflusst **SLC47A2** die pharmakokinetische Variabilität, Transporter–Transporter-Interaktionen und Stressreaktionen, die mit einer veränderten epithelialen Transportkapazität einhergehen. Eine dysregulierte Expression oder funktionelle Variation von **SLC47A2** ist daher relevant für Studien zur Nierenphysiologie, zu Arzneistoff-Dispositionswegen und zur transporterassoziierten Anfälligkeit für Phänotypen renaler Schädigung in experimentellen Modellen.

MATE2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SLC47A2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MATE2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SLC47A2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SLC47A2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MATE2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SLC47A2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MATE2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MATE2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SLC47A2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.