Maspin Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-416693-NIC

SERPINB5 codifica a Maspina (Maspin), um membro não clássico da família de inibidores de proteases de serina que atua como regulador dependente do contexto da adesão celular epitelial, da motilidade e das interações com a matriz extracelular. A Maspina influencia a remodelação do citoesqueleto e programas de sinalização célula–matriz ligados à migração e à invasão, e há relatos de que modula respostas ao estresse oxidativo e a regulação associada à cromatina por meio de interações com parceiros nucleares e citoplasmáticos. Alterações na expressão e na localização subcelular de SERPINB5 têm sido associadas a fenótipos de progressão tumoral em múltiplos tipos de tecido, tornando-o um nó molecular útil para estudar mecanismos do comportamento celular relacionado à metástase. Como um gene associado a biomarcadores na biologia do câncer, SERPINB5 é frequentemente investigado em modelos de diferenciação epitelial, invasão e remodelação do microambiente.

Maspin O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus SERPINB5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de SERPINB5. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função SERPINB5. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com SERPINB5 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.