Plásmido CRISPR de Activación (m2) MafB: sc-421335-ACT-2

El gen Mafb del ratón codifica el factor de transcripción MafB, una proteína de tipo cremallera de leucina básica que regula la especificación de linaje y la diferenciación terminal en macrófagos/monocitos, células endocrinas pancreáticas y podocitos en desarrollo del riñón mediante el control específico de secuencia de la expresión génica. MafB actúa dentro de programas transcripcionales y epigenéticos aguas abajo de vías de señalización del desarrollo e inmunitarias, influyendo en la polarización de macrófagos, las redes sensibles a citocinas y el mantenimiento de la estructura de los podocitos y de la integridad de la barrera de filtración. La actividad desregulada de Mafb se ha vinculado con alteraciones de la homeostasis inmunitaria y defectos en la organogénesis, y con frecuencia se analizan cambios en la expresión de MafB en modelos de lesión glomerular, disfunción de los islotes asociada a la diabetes y estrés inflamatorio. La edición génica de Mafb en ratón sustenta estudios mecanísticos de los circuitos transcripcionales, las decisiones de destino celular y la patología específica de tejido utilizando modelos in vivo, células primarias y sistemas de células madre diferenciadas.

MafB El plásmido de activación CRISPR (m2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Mafb sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MafB El plásmido de activación CRISPR (m2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Mafb en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Mafb, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MafB. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Mafb y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MafB en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MafB en células tumorales con expresión de Mafb silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.