mAChR M5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402943

概要

CHRM5はムスカリン性アセチルコリン受容体M5（mAChR M5）をコードしており、主としてGq/11に共役するGタンパク質共役受容体（GPCR）です。これによりホスホリパーゼC（PLC）シグナル伝達、イノシトールリン酸の産生、細胞内Ca2+動員、ならびにPKC依存性経路が促進されます。これらのセカンドメッセンジャーのカスケードを介して、mAChR M5は神経細胞の興奮性、シナプス伝達、血管緊張を調節し、さらにMAPK/ERKシグナル伝達を作動させて遺伝子発現プログラムに下流効果を及ぼすことがあります。CHRM5は限局した神経および末梢の細胞集団で発現しており、コリン作動性調節がドパミン作動性回路や神経血管調節と交差する場で機能します。ムスカリン性シグナル伝達の異常は神経精神疾患および神経学的表現型に関与すると示唆されており、疾患関連の細胞プロセスに対するコリン作動性経路の寄与を解明するために、CHRM5の摂動モデルを用いる意義が支持されています。

mAChR M5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCHRM5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CHRM5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CHRM5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、mAChR M5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、mAChR M5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CHRM5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• mAChR M5の機能に不可欠なCHRM5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CHRM5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• mAChR M5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびmAChR M5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CHRM5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  mAChR M5 HDRプラスミド（h）および mAChR M5 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCHRM5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCHRM5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。