mAChR M4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402318-ACT

CHRM4は、ヒトのムスカリン性アセチルコリン受容体M4（mAChR M4）をコードしています。これはGi/o共役型のGPCRで、アデニル酸シクラーゼを抑制してcAMPシグナル伝達を低下させ、さらにイオンチャネル活性を調節することで、神経細胞の興奮性やシナプス伝達を制御します。M4はコリン作動性神経伝達経路に関与し、シナプス前・シナプス後のシグナル伝達機構を通じてドーパミン作動性回路の出力を形作ります。下流ではMAPK/ERKシグナル、カルシウム動態、神経伝達物質放出の調節などが起こり、CHRM4の活性は運動および認知過程のネットワークレベルの制御と結び付けられています。ムスカリン受容体シグナルの変調や、CHRM4に関連する回路の調節異常は、統合失調症、パーキンソン病関連回路、物質使用に関連する表現型などの文脈を含め、神経精神疾患および運動障害の研究で検討されています。

mAChR M4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CHRM4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

mAChR M4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CHRM4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCHRM4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性mAChR M4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCHRM4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるmAChR M4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCHRM4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるmAChR M4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。