Plásmido Doble Nickase (h) mAChR M1: sc-401453-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)mAChR M1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa mAChR M1 (h) y el plásmido de doble nickasa mAChR M1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CHRM1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: mAChR M1 Anticuerpo (G-9): sc-365966
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) mAChR M1 | sc-401453-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) mAChR M1 | sc-401453-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHRM1 codifica el receptor muscarínico humano de acetilcolina M1 (mAChR M1), un receptor acoplado a proteína G que señaliza principalmente a través de Gq/11 para activar la fosfolipasa Cβ, elevar el Ca²⁺ intracelular y estimular programas transcripcionales dependientes de PKC. El mAChR M1 modula la excitabilidad neuronal, la plasticidad sináptica y la regulación colinérgica de circuitos corticales e hipocampales, con funciones adicionales en músculo liso periférico y tejidos secretores. La activación aguas abajo de MAPK/ERK y de la señalización asociada a PI3K vincula la actividad de CHRM1 con cambios en la expresión génica, el metabolismo celular y la dinámica de desensibilización/internalización del receptor. La señalización colinérgica desregulada que involucra a CHRM1 se ha estudiado en el contexto de fenotipos cognitivos y neuropsiquiátricos, así como de alteraciones más amplias de las vías de GPCR observadas en modelos celulares relevantes para enfermedades.
mAChR M1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CHRM1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CHRM1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CHRM1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CHRM1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.