mAChR M1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401453-ACT

CHRM1 kodiert den humanen muskarinischen Acetylcholinrezeptor M1 (mAChR M1), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der vorwiegend über Gq/11 signalisiert, um die Phospholipase C zu aktivieren, intrazelluläres Ca2+ zu erhöhen und PKC‑abhängige Signalkaskaden anzustoßen. Zu den nachgeschalteten Effekten zählen die Modulation der MAPK/ERK‑Signalübertragung, des Phosphoinositid‑Umsatzes sowie aktivitätsabhängiger Transkriptionsprogramme, die neuronale Erregbarkeit und synaptische Plastizität prägen. mAChR M1 beeinflusst außerdem die cholinerge Regulation kortikaler und hippokampaler Schaltkreise sowie sekretorische und glatte Muskelantworten in peripheren Geweben. Eine veränderte CHRM1‑Expression oder ‑Signalgebung wurde in neuropsychiatrischen und neurodegenerativen Forschungskontexten beschrieben, unter anderem in Studien zu Kognition, Aufmerksamkeit und cholinerger Dysfunktion.

mAChR M1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CHRM1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

mAChR M1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CHRM1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CHRM1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen mAChR M1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CHRM1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von mAChR M1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des mAChR M1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CHRM1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.