mAChR M1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401453-ACT

CHRM1は、ヒトのムスカリン性アセチルコリン受容体M1（mAChR M1）をコードする遺伝子であり、主にGq/11を介してシグナル伝達を行うGタンパク質共役型受容体（GPCR）です。これによりホスホリパーゼCが活性化され、細胞内Ca2+濃度が上昇し、PKC依存性のカスケードが刺激されます。下流では、MAPK/ERKシグナルの調節、ホスホイノシチド代謝回転、さらに神経細胞の興奮性やシナプス可塑性を形作る活動依存的な転写プログラムの制御などが起こります。mAChR M1はまた、大脳皮質および海馬回路におけるコリン作動性調節や、末梢組織における分泌反応および平滑筋反応にも影響します。CHRM1の発現やシグナル伝達の変化は、認知、注意、コリン作動性機能障害に関する研究を含む、神経精神疾患および神経変性疾患の研究領域で示唆されています。

mAChR M1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CHRM1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

mAChR M1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CHRM1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCHRM1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性mAChR M1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCHRM1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるmAChR M1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCHRM1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるmAChR M1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。