MACC1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404253-ACT

ヒトMACC1（metastasis associated in colon cancer 1）は、細胞運動性、浸潤性増殖、および生存プログラムの制御に関与する転写調節因子をコードしている。MACC1はHGF/METシグナル伝達および下流のPI3K–AKT経路やMAPK経路の活性と密接に関連し、上皮間葉転換（EMT）様の表現型や、細胞骨格および接着ダイナミクスの再編成を支える遺伝子発現変化を協調的に制御する。MACC1発現の変化は、複数の固形がんにおける腫瘍進展や転移能と関連づけられており、増殖因子の感知と遊走を結び付ける転写ネットワークを研究するうえで有用な分子ハブとなる。そのため、MACC1の制御機構や下流標的は、浸潤、転移関連の転写シグネチャー、ならびに経路間クロストークの解析など、がん生物学モデルにおいて頻繁に検討されている。

MACC1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MACC1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MACC1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MACC1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMACC1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MACC1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMACC1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMACC1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMACC1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMACC1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。