LTK CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421486

概要

マウスLtkは、白血球チロシンキナーゼ（LTK）をコードしており、細胞増殖・生存・分化を制御するシグナル伝達を調節する受容体型チロシンキナーゼです。LTKの自己リン酸化は、MAPK/ERK系やPI3K/AKT関連シグナル伝達を含む下流のキナーゼカスケードを活性化し、細胞増殖やストレス応答プログラムに影響を与えます。免疫系および神経系の文脈では、LTKは系譜決定や機能的成熟と関連づけられており、受容体型チロシンキナーゼネットワーク間のクロストークや発生シグナルの研究において重要です。LTK活性の変化を含むRTKシグナル伝達の破綻は、異常増殖や形質転換のモデルでしばしば検討されており、疾患関連シグナル回路の機序解析に有用です。

LTK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるLtk遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ltk内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ltkのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LTKタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、LTKシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ltk欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• LTKの機能に不可欠なLtkエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ltkゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• LTK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびLTK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ltk遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  LTK HDRプラスミド（m）および LTK HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLtkホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLtk標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。