LTBP-3 Lentiviral Activation Particles (m): sc-421482-LAC

Ltbp3 kodiert das latente Transforming-Growth-Factor-β-Bindungsprotein 3 (LTBP-3), ein extrazelluläres Matrix-Glykoprotein, das an latente TGF-β‑Komplexe bindet und deren Sekretion, Speicherung und Aktivierung in der perizellulären Nische reguliert. Durch die Kontrolle der Bioverfügbarkeit von TGF-β beeinflusst LTBP-3 SMAD-abhängige Transkriptionsprogramme, die das Verhalten mesenchymaler Zellen, den Umbau der extrazellulären Matrix und die Entwicklungsmusterbildung steuern. In Mausmodellen wurde eine veränderte Ltbp3-Aktivität mit einer gestörten Homöostase des Bindegewebes sowie Defekten in der Skelett-, kraniofazialen und kardiovaskulären Entwicklung in Verbindung gebracht, was die zentrale Rolle der TGF-β‑Signalgebung in der Morphogenese widerspiegelt. Diese Eigenschaften machen LTBP-3 zu einem geeigneten Knotenpunkt, um das Zusammenspiel zwischen ECM und Wachstumsfaktoren, Mechanotransduktion und Signaldynamik in Fibroblasten, osteogenen Zelllinien und Gefäßzellen zu untersuchen.

LTBP-3 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Ltbp3-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

LTBP-3 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Ltbp3-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen LTBP-3-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Ltbp3-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.