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LSD1双切口酶质粒(h) | sc-401294-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LSD1双切口酶质粒(h2) | sc-401294-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KDM1A 编码赖氨酸特异性去甲基化酶 1(LSD1),这是一种 FAD 依赖性的胺氧化酶,可去除组蛋白 H3 上的单甲基和二甲基标记(主要作用于 H3K4,并在特定背景下作用于 H3K9),从而调控染色质可及性与转录程序。LSD1 常在 CoREST、NuRD 等共抑制与染色质重塑复合体中发挥作用,将组蛋白去甲基化与 DNA 甲基化、增强子调控以及谱系特异性基因表达联系起来。通过这些表观遗传机制,LSD1 影响细胞周期进程、分化以及干样状态的维持。KDM1A 活性失调及 LSD1 复合体组成改变,已与多种癌症及其他涉及表观遗传失衡的疾病中的异常转录调控相关。
LSD1 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 KDM1A 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对KDM1A内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏KDM1A的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了KDM1A基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。