LSD1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401294-ACT

ヒトKDM1Aは、リジン特異的脱メチル化酵素1（LSD1）をコードしている。LSD1はFAD依存性のヒストン脱メチル化酵素であり、H3K4およびH3K9のモノメチル化・ジメチル化マークを除去することで、クロマチンのアクセス性と転写プログラムを制御する。LSD1はコリプレッサー複合体やクロマチンリモデリング複合体の一員として機能し、細胞運命決定、増殖、分化の過程においてエンハンサーおよびプロモーター活性を協調的に調節する。転写のエピジェネティック制御に組み込まれることにより、LSD1は系譜特異化、DNA損傷応答、ホルモン受容体依存的な遺伝子制御に関連する経路に影響を及ぼす。KDM1A/LSD1の活性や発現の異常は、多様ながんや神経発達関連の表現型で観察される遺伝子発現状態の変化と関連づけられており、疾患モデルにおける機序研究での重要性を支持している。

LSD1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KDM1Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LSD1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KDM1A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKDM1A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LSD1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKDM1A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLSD1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKDM1A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLSD1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。