LRSAM1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407099

概要

LRSAM1（leucine rich repeat and sterile alpha motif containing 1）は、細胞質に局在するRING型E3ユビキチンリガーゼをコードし、TSG101やESCRT複合体の他の構成因子との相互作用を通じて、ユビキチン依存的なタンパク質品質管理およびエンドソーム輸送に関与します。特定基質のユビキチン化と分解（ターンオーバー）を制御することで、LRSAM1は細胞内ソーティング、膜動態、ならびに神経細胞の恒常性に影響を与えます。LRSAM1機能の破綻は、シャルコー・マリー・トゥース病2P型を含む末梢神経障害と関連づけられており、軸索維持やプロテオスタシス経路との関係において重要性が示されています。そのためLRSAM1は、ユビキチンシグナル伝達、小胞輸送、神経変性に関連する細胞ストレス応答の研究において注目されています。

LRSAM1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるLRSAM1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、LRSAM1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、LRSAM1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LRSAM1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、LRSAM1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、LRSAM1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• LRSAM1の機能に不可欠なLRSAM1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、LRSAM1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• LRSAM1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびLRSAM1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、LRSAM1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  LRSAM1 HDRプラスミド（h）および LRSAM1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLRSAM1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLRSAM1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。