LRRC8D Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406426

Descripción general

LRRC8D codifica una subunidad con repeticiones ricas en leucina del canal aniónico regulado por volumen (VRAC), un complejo heteromérico que media el flujo de aniones activado por el hinchamiento y contribuye a la homeostasis del volumen celular. Los ensamblajes de VRAC que contienen LRRC8D influyen en el transporte de osmólitos y aniones pequeños y pueden modular el equilibrio redox y las respuestas celulares al estrés, conectando con procesos como la proliferación, la apoptosis y la señalización inflamatoria. En tejidos inmunitarios y de barrera, la composición del VRAC que incluye LRRC8D se ha relacionado con la regulación del manejo de especies reactivas de oxígeno y con salidas de señalización dependientes del estímulo. La actividad desregulada del VRAC y los patrones alterados de expresión de subunidades LRRC8 se han investigado en contextos que incluyen la biología del cáncer, el estrés metabólico y la fisiopatología mediada por el sistema inmunitario, donde a menudo se remodelan las vías de transporte iónico y de estrés oxidativo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LRRC8D (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen LRRC8D en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del LRRC8D junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de LRRC8D tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LRRC8D.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en LRRC8D para la investigación de la señalización de LRRC8D, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de LRRC8D críticos para la función de LRRC8D
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de LRRC8D para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LRRC8D CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido LRRC8D CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus LRRC8D. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LRRC8D (h) y el plásmido HDR LRRC8D (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología LRRC8D para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana LRRC8D definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.