LRP16 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405616

Panoramica

MACROD1 codifica LRP16, una proteina nucleare contenente un macrodomain che lega l’ADP-ribosio e funge da “eraser” della mono-ADP-ribosilazione sulle proteine bersaglio. LRP16 partecipa alla regolazione di programmi trascrizionali e di processi associati alla cromatina, inclusa l’interazione con la segnalazione dei recettori nucleari per gli ormoni e con le vie di ADP-ribosilazione dipendenti da PARP che influenzano le risposte al danno del DNA. Attraverso queste attività, MACROD1 può incidere sul controllo del ciclo cellulare, sulla segnalazione in risposta allo stress e sul mantenimento della stabilità genomica. Un’alterazione dell’espressione o della funzione di MACROD1/LRP16 è stata riportata in molteplici contesti tumorali ed è spesso oggetto di studio in relazione a proliferazione, segnalazione di sopravvivenza e riprogrammazione trascrizionale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LRP16 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MACROD1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MACROD1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MACROD1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LRP16.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MACROD1 per lo studio della segnalazione di LRP16, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MACROD1 critici per la funzione di LRP16
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MACROD1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LRP16 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LRP16 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MACROD1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LRP16 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LRP16 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MACROD1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MACROD1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.