LRP CRISPR Activationプラスミド (m): sc-429657-ACT

マウスのMvpは、LRP（major vault protein）をコードしており、これは細胞質内輸送、核‐細胞質間輸送、およびストレス応答性シグナル伝達に関与するとされるボールト（vault）リボ核タンパク質粒子の主要な構造構成要素です。LRPは、薬物輸送や解毒プロセスを含む異物（xenobiotic）処理や細胞恒常性を制御する経路と相互作用し、状況によってはPI3K/AKTやMAPK関連応答の調節に関与することも示唆されています。MVP/LRPの発現変化は、多剤耐性表現型やアポトーシス感受性の変動と関連づけられており、腫瘍細胞の適応や治療応答を研究する上で重要です。免疫系および上皮系においても、ボールト粒子の生物学は自然免疫プログラムや炎症関連シグナル伝達と結びついており、がんモデルから宿主応答モデルまで幅広い研究での検討を後押しします。

LRP CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Mvpの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LRP CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Mvp 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMvp転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LRPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMvp遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLRP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMvp発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLRP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。